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RAP-seq技術——無需特異性抗體,高效解析RNA-蛋白互作調控網絡

更新時間:2025-07-28   點擊次數:175次

在細胞的生命活動中,RNA結合蛋白(RBP)與RNA的互作如同精密的“分子開關",調控著mRNA的穩定性、翻譯效率及亞細胞定位等關鍵過程。無論是植物應對鹽堿干旱的逆境適應,還是人類疾病中的基因表達異常,這些生命現象的調控機制均與RBP與RNA的動態互作密切相關。然而,傳統技術如RIP-seq、CLIP-seq受限于抗體質量和通量瓶頸,難以高效解析這類互作網絡。

藍景科信RAP-seq技術:突破傳統的互作研究方案

RNA親和純化測序(RNA Affinity Purification Sequencing, RAP-seq) 是藍景科信自主研發的創新技術,通過體外重組蛋白表達-RNA親和捕獲-高通量測序的全流程設計,實現了RBP結合RNA的高效鑒定。

技術流程:

1. 重組蛋白制備:體外表達帶標簽(如HaloTag)的目標RBP;

2. RNA親和純化:重組蛋白與總RNA孵育,特異性捕獲互作RNA;

3. 高通量測序和分析:分離結合RNA,構建文庫并測序,解析互作轉錄本。

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RAP-seq vs 傳統技術:三大優勢

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RAP-seq的多維應用場景

l  植物逆境應答:解析RBP在干旱、鹽堿、高溫等脅迫下的調控網絡; 

l  發育生物學:追蹤胚胎發育、器官分化中的RNA-蛋白互作動態; 

l  疾病機制研究:篩選癌癥、神經退行性疾病中異常表達的RBP及其靶RNA 

l  作物育種:鑒定調控產量、品質的關鍵RBP,輔助分子育種。 

應用案例:RAP-seq在植物逆境研究中的應用

案例一:胡楊耐鹽機制的分子解碼

文章標題:Populus euphratica GRP2 Interacts with Target mRNAs to Negatively Regulate Salt Tolerance by Interfering with Photosynthesis, Na+, and ROS Homeostasis

期刊:International journal of molecular sciences

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技術應用:利用RAP-seq鑒定胡楊GRP2蛋白結合的mRNA,發現其通過靶向光合作用相關基因(如PETCRBCMT)和抗氧化酶基因(SOD[Mn]CDSP32),抑制耐鹽相關通路,揭示GRP2作為負調控因子的分子機制。

案例二:楊樹耐旱基因的互作網絡解析

文章標題:Rare variations within the serine/arginine-rich splicing factor PtoRSZ21 modulate stomatal size to determine drought tolerance in Populus

期刊:New Phytologist

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技術應用:RAP-seq揭示PtoRSZ21蛋白直接結合自噬相關基因PtoATG2mRNA,通過可變剪接調控氣孔發育,證明該蛋白通過重塑RNA互作網絡增強耐旱性。